1．濾光片波長精度檢查及其峰值測定：用高精度紫外可見分光光度計(jì)（波長精度±

0.3nm）對不同波長的濾光片進(jìn)行光譜掃描，檢測值與標(biāo)定值之差即為濾光片波長精度，其差值越接近于零且峰值越大表示濾光片的質(zhì)量越好。

2．靈敏度和準(zhǔn)確度：（1）靈敏度：加200µl  6µg/ml重鉻酸鉀溶液于小孔中，以0.05mo1

／L硫酸溶液作空白，于450nm（參比波長650nm）測定，其吸光度應(yīng)≥0.01（2）準(zhǔn)確度：準(zhǔn)確配制1mmol/L對硝基苯酚水溶液，以10mmo1／L氫氧化鈉溶液25倍稀釋后加入200µl

于小孔杯中作空白，于405nm（參比波長650nm）檢測，其吸光度應(yīng)在0.4左右。

3．通道差與孔間差檢測：（1）通道差檢測：取一只酶標(biāo)微孔杯以酶標(biāo)板架作載體，將其內(nèi)含200 μl甲基橙溶液，吸光度0.5左右先后置于八個(gè)通道的相應(yīng)位置，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長（測定波長490nm，參比波長630nm或650nm）連續(xù)測三次，觀察其不同通道之間測量結(jié)果的一致性（2）孔間差的測量：選擇同一廠家、同一批號酶標(biāo)板條（8條共96孔）分別加入200µl甲基橙溶液（吸光度調(diào)至0.065～0.070）先后置于同一通道，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長檢測，其誤差大小用±1.96s衡量。

4．零點(diǎn)飄移：取8只小孔杯，分別置于8個(gè)通道的相應(yīng)位置，均加入200µl蒸餾水并調(diào)零，采用雙波長或單波長（490nm）每隔30min測定一次，觀察8個(gè)通道4h內(nèi)的吸光度變化，其與零點(diǎn)的差值即為零點(diǎn)飄移。

5．精密度評價(jià)：每個(gè)通道3只小杯，分別加入200µl高、中、低三種不同濃度的甲基橙溶液，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長作雙份平行測定，每日測定兩次，連續(xù)測定20天。分別計(jì)算其批內(nèi)精密度、日內(nèi)批間精密度、日間精密度和總精密度及相應(yīng)的CV值。

6．線性測定：準(zhǔn)確稱取甲基橙配制5個(gè)系列濃度的溶液，采用雙波長平行檢測8次，求其均值。計(jì)算回歸方程、相關(guān)系數(shù)r及標(biāo)準(zhǔn)估計(jì)誤差Sy,x，并用±1.96Sy,x表示樣品的95％測量范圍。

7．雙波長評價(jià)：取同一廠家、同一批號酶標(biāo)板條（每個(gè)通道2條共24孔）每孔加入200µl

甲基橙溶液（吸光度調(diào)至0.065～0.070 ）先后于8個(gè)通道分別采用單波長（490 nm）和雙波長（測定波長490nm、參比波長630 nm／650nm）進(jìn)行檢測，計(jì)算單波長和雙波長測定結(jié)果的均值、離散度，比較各組之間是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異以考察雙波長清除干擾因素的效果。